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開(kāi)發(fā)PCR技術(shù)的諾貝爾獎(jiǎng)得主卡里·穆利斯逝世
發(fā)布時(shí)間:2020.01.10|來(lái)源:
        1993 年,他因開(kāi)發(fā)了聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(PCR)獲諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。這一發(fā)現(xiàn)不僅用于基礎(chǔ)研究,還可以用于各種臨床診斷,甚至用于犯罪偵察。如今 PCR 已成為生物化學(xué)和分子生物學(xué)的一項(xiàng)核心技術(shù),《紐約時(shí)報(bào)》如此評(píng)價(jià):" 具有高度原創(chuàng)性和重大意義,幾乎將生物學(xué)分為 PCR 前和 PCR 后兩個(gè)時(shí)代。"
 
         1944 年 12 月,穆利斯出生于美國(guó)北卡羅來(lái)納州勒諾瓦。
         20世紀(jì)50年代,穆利斯即對(duì)化學(xué)萌生了濃厚的興趣,當(dāng)他還是一名高中生時(shí)就學(xué)會(huì)了如何用化學(xué)方法合成和制造用于火箭推進(jìn)的固體燃料。因此,他在大學(xué)時(shí)期理所當(dāng)然選擇了化學(xué)專(zhuān)業(yè)。
 
         1966年,穆利斯畢業(yè)于佐治亞理工學(xué)院化學(xué)系。
 
         1972年,穆利斯在加州大學(xué)伯克利分校取得生物化學(xué)博士學(xué)位,其研究工作集中于如何合成蛋白質(zhì)、研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。在經(jīng)歷兩年博士后工作后,穆利斯隨后前往生物技術(shù)公司Cetus任職。穆利斯在Cetus做了7年的DNA化學(xué)家。
1983年,穆利斯發(fā)明了PCR技術(shù)。
 
        眾所周知,DNA 作為一種最重要的生命基礎(chǔ)分子,包含大量的信息,是建構(gòu)細(xì)胞內(nèi)其他化合物的最終源頭,是生物獨(dú)一無(wú)二的身份密碼,人們可以用這個(gè)特性進(jìn)行身份鑒定、考古探測(cè)、刑事偵查等等工作??扇绻?DNA 片段太少,人們就無(wú)法獲得太多信息,需要對(duì) DNA 進(jìn)行 " 擴(kuò)增 "。
 
       “如果你的研究能力一般,那么,改革本研究領(lǐng)域中大家習(xí)以為常的最基本的技術(shù),你就有可能獲諾貝爾獎(jiǎng)。”
穆利斯博士的名字在1987年發(fā)行的實(shí)驗(yàn)手冊(cè)中有記載。穆利斯在美國(guó)生物開(kāi)發(fā)公司工作期間,開(kāi)發(fā)出了簡(jiǎn)易DNA(脫氧核糖核酸)擴(kuò)增法(我國(guó)稱(chēng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法,是一種使DNA核苷酸鏈增長(zhǎng),可以獲得更多的DNA片斷的方法)?,F(xiàn)在,他已經(jīng)創(chuàng)辦了自己的公司,并且出任會(huì)長(zhǎng)。
 
        大約30年前,霍拉納博士合成了寡聚核苷酸,同時(shí),他利用合成的寡聚核苷酸、DNA合成酶以及DNA,開(kāi)發(fā)出了使DNA擴(kuò)增的方法。包括我們?cè)趦?nèi),這一領(lǐng)域的研究人員通常都使用霍拉納的DNA擴(kuò)增技術(shù)??梢哉f(shuō),這是一個(gè)司空見(jiàn)慣的基本技術(shù),誰(shuí)也沒(méi)有去想過(guò)這種方法的不便之處。
 
         因此,30年來(lái)沒(méi)有人去改革這個(gè)方法,人人都滿(mǎn)足于這個(gè)方法。就連穆利斯本人在大學(xué)做基礎(chǔ)研究時(shí),也沒(méi)有想到要去開(kāi)發(fā)一種更簡(jiǎn)便的方法,以取代霍拉納的方法。直到他在生物開(kāi)發(fā)公司工作之后,出于業(yè)務(wù)上的需要,才產(chǎn)生了怎樣才能使極微量DNA迅速大幅度擴(kuò)增的想法。
 
         一般說(shuō),用霍拉納的方法可以使DNA擴(kuò)增1倍,若擴(kuò)增后仍無(wú)法滿(mǎn)足需要,便需對(duì)擴(kuò)增后的DNA進(jìn)行熱處理,拆開(kāi)DNA的雙螺旋鏈。由于熱處理后酶會(huì)失去活性,此時(shí)還要添加新的酶然后發(fā)生反應(yīng),這樣可使DNA再擴(kuò)增1倍。如果擴(kuò)增前的DNA的量非常少,那么,用霍拉納的方法擴(kuò)增就會(huì)感到非常不方便。穆利斯大概多次面對(duì)極微量的DNA的擴(kuò)增問(wèn)題,感受到了實(shí)驗(yàn)中的不便并由此產(chǎn)生了一種想法,那就是:為什么不使用一種熱處理后不會(huì)喪失活性的酶呢?
使DNA合成酶變成耐熱性合成酶,穆利斯想到了,也做到了。他提出了同時(shí)使用兩個(gè)寡聚核苷酸引物的改良型擴(kuò)增方法。在以后的實(shí)驗(yàn)中,他的改良型的簡(jiǎn)易DNA擴(kuò)增法①發(fā)揮了威力。如今,在不用重新添加酶的情況下,只要熱處理反應(yīng)和擴(kuò)增反應(yīng)各進(jìn)行一次,就可以使DNA再擴(kuò)增一倍。哪怕最初的DNA微小到只有痕跡的程度,經(jīng)幾次熱處理和擴(kuò)增反應(yīng)后,也完全可以擴(kuò)增到測(cè)定DNA堿基排列所需的足夠的量。
 
        " 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) " 需要 4 種成分:被復(fù)制的雙鏈 DNA 片段,稱(chēng)為模板 DNA;兩個(gè)寡核苷酸引物:?jiǎn)捂?DNA 的短片段,每一個(gè)都與模板 DNA 鏈上的短序列互補(bǔ);核苷酸,構(gòu)成 DNA 的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ);一種(耐熱的)DNA 聚合酶,它通過(guò)以正確的順序加入游離核苷酸來(lái)復(fù)制模板 DNA(而且不會(huì)因?yàn)榧訜岫Щ睿@樣就不必反復(fù)添加)。這些成分被加熱,導(dǎo)致模板 DNA 分裂成兩股。然后將混合物冷卻,使引物附著在模板鏈上的互補(bǔ)位點(diǎn)上。接著,聚合酶可以通過(guò)添加核苷酸開(kāi)始復(fù)制模板鏈,產(chǎn)生兩個(gè)雙鏈 DNA 分子。重復(fù)這個(gè)周期,就能 1 變 2,2 變 4,4 變 8 ……指數(shù)倍地增加 DNA 的數(shù)量——如果每個(gè)周期只有兩分鐘,一小時(shí)內(nèi)周期就能重復(fù)三十次,而這就能產(chǎn)生超過(guò) 10 億個(gè)原始 DNA 序列的副本。
聚合酶鏈鎖反應(yīng)的第一個(gè)循環(huán):兩個(gè)引物分別與待復(fù)制 DNA 的兩個(gè)鏈上的特定序列結(jié)合,然后 DNA 聚合酶開(kāi)始分別地復(fù)制。
 
         穆利斯發(fā)明的 PCR 技術(shù)有著極其廣泛的應(yīng)用。在醫(yī)學(xué)診斷中,該技術(shù)使直接從很小的遺傳物質(zhì)樣本中識(shí)別細(xì)菌或病毒感染的病原體成為可能;它還被用于篩查鐮狀細(xì)胞性貧血和亨廷頓舞蹈癥等遺傳病患者;進(jìn)化生物學(xué)家可利用該技術(shù)研究從遠(yuǎn)古物種化石殘骸中提取出微量 DNA,法醫(yī)學(xué)家則利用 PCR 技術(shù)從犯罪現(xiàn)場(chǎng)遺留的血跡、精液或發(fā)絲中識(shí)別犯罪嫌疑人或受害者。
 
         如今這項(xiàng)技術(shù)變得更加平價(jià),更加自動(dòng)化。這徹底改變了生物化學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、醫(yī)學(xué)和法醫(yī)學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域,并最終使人類(lèi)基因組圖譜得以繪制出來(lái)。
 
         在獲得諾貝爾獎(jiǎng)之后,穆利斯曾對(duì)《紐約時(shí)報(bào)》說(shuō)," 我或多或少地受到了自己的欲望的支配,而不是別人的想法。我不認(rèn)為現(xiàn)在我需要做一些更大更好的事情。"
穆利斯精明,尖銳,總是驚人地坦誠(chéng),經(jīng)常發(fā)表一些令人大跌眼鏡的言論。他于 1998 年出版了一本幽默的自傳《心靈裸舞》(Dancing Naked in the Mind Field),在這本自傳中,他質(zhì)疑HIV病毒導(dǎo)致艾滋病,認(rèn)為并無(wú)足夠的科學(xué)根據(jù),還公開(kāi)表示他對(duì)占星術(shù)的支持。穆利斯的這些言論也引發(fā)了諸多爭(zhēng)議。
 
        穆利斯的去世是科學(xué)界的一個(gè)損失,但他灑脫隨性,興致盎然地度過(guò)了豐富有趣的人生。這不能不說(shuō)是一種完滿(mǎn)。就像他在自傳中寫(xiě)的那樣:
" 人類(lèi)應(yīng)該做的就是為生命的存在感到幸運(yùn)……坐下來(lái)喝杯啤酒,放松。這就是為什么在真正學(xué)會(huì)享受生活之前,人們不得不一次又一次地回到起點(diǎn)的原因。
        " 天沒(méi)有塌。"
 
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