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致力于生命研究、生物檢測(cè)技術(shù)的多領(lǐng)域開(kāi)發(fā)
基因克?。╣ene cloning）是將提取或合成的目的基因，與具有自主復(fù)制能力的載體（vector）基因拼接重組，并導(dǎo)入受體細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖從而形成新的基因分子的過(guò)程。
自上世紀(jì)七十年代創(chuàng)建第一個(gè)重組DNA分子克隆以來(lái)，基因克隆成為分子生物學(xué)的核心技術(shù)，促進(jìn)了生物分子學(xué)進(jìn)步，也有力推動(dòng)了生物醫(yī)學(xué)研究和產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展。
基因克隆技術(shù)首先有助于精準(zhǔn)分析目的基因的表達(dá)與調(diào)控、蛋白相互作用，包括調(diào)控元件、轉(zhuǎn)錄因子研究以及非編碼RNA研究等；其次，可以用于難以獲取的天然蛋白的大規(guī)模生產(chǎn)；然后，可用于定型改造生物基因組結(jié)構(gòu)，使之具有更大應(yīng)用前景。此外，近年來(lái)隨著基因測(cè)序與分析需求的增長(zhǎng)和新一代測(cè)序技術(shù)（NGS）的發(fā)展，基因克隆技術(shù)也發(fā)揮著日益重要的作用。
根據(jù)基因克隆的類(lèi)型，可以分為以下三大類(lèi)：
一、經(jīng)典基因克隆，需要限制性?xún)?nèi)切酶和連接酶。這也是目前應(yīng)用最為廣泛的基因克隆手段，具有操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，但受制于限制性?xún)?nèi)切酶酶切位點(diǎn)和連接酶效率，一般適合于小片段基因克隆。
二、需要修飾酶的基因克隆，不需要限制性?xún)?nèi)切酶和連接酶，提高了基因克隆的靈活性和應(yīng)用空間，如UDG（尿嘧啶DNA糖基化酶）克隆法，具有操作簡(jiǎn)單、克隆效率高的特點(diǎn)。
三、需要重組酶的基因克隆，利用重組酶及其特異識(shí)別位點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)快速、高效的靶向克隆，不僅可實(shí)現(xiàn)高通量克隆，還可適合于原核生物、酵母、昆蟲(chóng)細(xì)胞及哺乳動(dòng)物細(xì)胞等多系統(tǒng)的表達(dá)載體。目前，基于重組酶的基因克隆技術(shù)，如GateWay技術(shù)和Golden Gate技術(shù)等得到普遍關(guān)注。
經(jīng)典的基因克隆方法主要包括：目的基因制備、限制性?xún)?nèi)切酶消化切割目的基因和載體、用DNA連接酶連接酶切后的基因和載體，制備DNA重組體；將DNA重組體導(dǎo)入宿主細(xì)胞、篩選克隆及鑒定以及目的基因在宿主細(xì)胞中的擴(kuò)增和表達(dá)等步驟。
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